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t4DnA连接酶反应时间

主要搞清楚自己的两段的酶切位点是什么?估计肯定是粘端切口,但是有的粘端切口的连接是要平端的连接条件,比如Xhol I就是产生粘端切口,但是推荐使用平端连接条件.我用过3种T4连接酶,只有ferment的说明书上有平端连接的反映体系,promega and...

没影响的,T4DNA连接酶的最佳反应温度是16℃,一般4℃可以过夜的

t4dna连接酶反应4~6小时最佳。

T4DNA连接酶作用机制:分子生物学试验中主要采用T4DNA连接酶,因该酶在正常条件下,即能完成连接反应。T4 DNA 连接酶是一单链多肽,分子量为68,000道尔顿,它能催化双链DNA上相邻的3ˊ羟基和5ˊ磷酸末断形成磷酸二脂键。λDNA用EcoRI酶切割后形成的...

E·coliDNA连接酶是从大肠杆菌中获得的DNA 连接酶 只能连接粘性末端 而平末端则要交给T4DNA连接酶了 它可以连接粘性末端也可以连接平末端

buffer中加入镁离子

这个没有实验证明过,只知道DNA连接酶在高温不稳定,所以一般都用16℃连接过夜。25℃左右的室温估计会维持七八个小时。

E.coliDNA连接酶和T4连接酶的区别:E·coliDNA连接酶是从大肠杆菌中获得的DNA 连接酶 只能连接粘性末端,而平末端则要交给T4DNA连接酶了 它可以连接粘性末端也可以连接平末端。 连接酶通常是包括“连接酶”这个字,就如DNA连接酶是将脱氧核糖核酸(...

常用的DNA连接酶有两种:来自大肠杆菌的DNA连接酶和来自噬菌体的T4DNA连接酶。二者的作用机理类似。T4连接酶作用分三步:(1) T4DNA连接酶与辅助因子ATP形成酶-AMP复合物。(2) 酶-AMP复合物结合到具有5’-磷酸基和3’-羟基切口的DNA上,使DNA腺...

现在常用的DNA连接酶有T4 DNA连接酶和大肠杆菌DNA连接酶,T4 DNA连接酶可以连接平末端,也可以连接粘性末端,大肠杆菌DNA连接酶只能连接黏性末端。不知道你说的这个“DNA连接酶”是哪种? 一般在实验中常用的连接酶是T4 DNA连接酶。

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